解決金線蓮種子自然萌發(fā)成苗效率低的方法
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金線蓮是多年生的珍惜中草藥被稱為“藥王”、“神藥”等等,金絲蓮中氨基酸的成分和含量及抗衰老活性微量元素的含量均高于國產(chǎn)和野生西洋參。除此之外還能作為極具觀賞價值的室內(nèi)觀賞植物。金線蓮種子因缺少胚乳在自然條件下很難獨立萌發(fā)成苗,再加上近年自然環(huán)境遭受嚴(yán)重破壞、人工的過度挖掘、鳥、蟲、蛇等為害使野生金線蓮瀕臨滅絕。 因此金線蓮的人工培養(yǎng)技術(shù)顯得尤為重要,而人工培養(yǎng)條件下種子萌發(fā)成苗仍然是整個培養(yǎng)過程的技術(shù)瓶頸之一,由于缺乏有效的誘導(dǎo)方法,因此現(xiàn)有技術(shù)中金線蓮種子的萌發(fā)率較低,嚴(yán)重制約了金線蓮培養(yǎng)技術(shù)的規(guī)模化應(yīng)用。
1、內(nèi)生真菌的獲得
將野生金線蓮的根采下用自來水洗凈泥沙,肥皂水浸泡10-20min再沖洗干凈,75%酒精表面消毒30s、0.1%升汞消毒5min,最后無菌水沖洗5遍。將每條根剪成若干0.5-1.0cm的根段,平放在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA平板培養(yǎng)基,事先滅菌分裝在無菌的培養(yǎng)皿中)上,每個培養(yǎng)皿接5個根段。對照組為最后一次的清洗液涂在培養(yǎng)皿中,接種40個培養(yǎng)皿,封口膜封好放于28℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行暗培養(yǎng)。 待菌長出后通過劃線的方法進(jìn)行純化。在超凈工作臺上用接種針輕輕挑起少許菌絲,在PDA平板培養(yǎng)基上劃斜線,隨后用封口膜封好培養(yǎng)皿。觀察菌產(chǎn)生的菌落形態(tài)合并相同形態(tài)的菌,將分離出的純菌繼續(xù)用PDA平板培養(yǎng)基培養(yǎng),純菌接種于試管中于-20℃冰箱中保存。 待金線蓮種子成熟時將真菌從冰箱中取出,用接種針逐一挑出真菌接種在PDA培養(yǎng)基上,放于28℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行暗培養(yǎng)。培養(yǎng)7-lOd后進(jìn)行共生培養(yǎng)研究。
2、真菌與種子共生培養(yǎng)
將發(fā)酵好的牛糞和木屑基質(zhì)加入少量蒸餾水,用手握基質(zhì)濕潤又捏不出水即可,分裝在若干培養(yǎng)瓶中,高溫高壓滅菌冷卻備用。 按照常規(guī)蘭科種子消毒方法對金線蓮茹果進(jìn)行消毒,用解剖刀將茹果劃開將種子抖落在滅好菌的牛糞和木屑基質(zhì)中。分別在PDA培養(yǎng)基上截取lcmX 1cm真菌小塊,放于播完種的牛糞和木屑基質(zhì)中,每種真菌在2種基質(zhì)中各接種3瓶??瞻讓φ罩徊シN不接種真菌。將接完菌和種子的培養(yǎng)瓶放于28℃黑暗條件下培養(yǎng)1周,隨后培養(yǎng)條件為光照時間12h/d,光照強度為2000-25001x,培養(yǎng)溫度26±2 ℃,觀察種子萌發(fā)情況。
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